SC∕T 7223.4-2017 黏孢子虫病诊断规程 第4部分：吉陶单极虫(水产)
|
ID： |
30CE17B1367D438994EBEB2EDC1D3316 |
|
文件大小(MB)： |
0.36 |
|
页数： |
10 |
|
文件格式： |
|
|
日期： |
2021-12-25 |
|
购买： |
文本摘录（文本识别可能有误，但文件阅览显示及打印正常，pdf文件可进行文字搜索定位）：
ICS 65.020.30,B 41,←:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7223.4-2017,黠抱子虫病诊断规程,第4 部分:吉陶单极虫,Protocols for diagnosis of myxosporidiosisPart,4: Disease caused by Thelohanellus kitauei,2017 - 06 - 12 发布2017 -1 0 - 01 实施,中华人民共和国农业部发布,SC/T 7223.4-2017,目U 昌,SCj T 7223 (( 黠抱子虫病诊断规程》拟分为如下部分:,一一第1 部分:洪湖腆泡虫;,一一第2 部分:吴李腆泡虫;,一一第3 部分: 武汉单极虫;,一一第4 部分:吉陶单极虫,本部分为SCj T 7223 的第4 部分,本部分按照GBj T 1. 1~2009 给出的规则起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本部分由农业部渔业渔政管理局提出,本部分由全国水产标准化技术委员会(SACj TC 156) 归口,本部分起草单位:中国科学院水生生物研究所,本部分主要起草人:李文祥、王桂堂、邹红、熊凡、吴山功、李明,I,范围,黯抱子虫病诊断规程,第4 部分:吉陶单极虫,本部分给出了鲤CCyprinus car:,lus kitauei) 的采集、固定与,本部分适用于鲤吉陶,2,下列文件对,件。凡是不注日,GB/ T 66,SC/ T 71,3,3. 1,3. 2,3. 3,3. 4,3. 5 上游引,下游引,本对引,3. 6 DNA,3. 7 其他试剂见,4 仪器和设备,4. 1 解剖盘、剪刀、慑子、,4.2 体视显微镜和带测微标,4. 3 盖玻片、载玻片和培养皿,4. 4 电子天平,4. 5 普通台式离心机和高速冷冻离心机,4. 6 普通冰箱,4. 7 微量移液器,4. 8 PCR 扩增仪,4. 9 离心管和PCR 管,4. 10 紫外透射仪或凝胶成像系统,4. 11 水平电泳系统,SC/T 7223. 4-2017,规定了吉陶单极虫CThelohanel,吉陶单极虫病的综合判定,l,SC/T 7223. 4-2017,5 感染对象与临床症状,5. 1 感染对象,吉陶单极虫感染鲤,5.2 临床症状,吉陶单极虫寄生于鲤的肠道内，病鱼在池边独游，行动迟缓，不摄食，鱼体发黑消瘦;腹部稍隆起，肠,道呈结节型膨大，形成瘤状;肠壁变薄， 有腹水,6 吉陶单极虫的采集、固定与标本制作,6. 1 病鱼采集,观察待检鱼的临床症状和行为，采集具有典型症状的鱼，采样方法、样品数量、样品封存和运输应符,合SC/ T 7103 的规定,6. 2 样品的采集,剖开腹部，剪开肠道的膨大处，用慑子取出包囊，置于培养皿中,6. 3 样品的固定,用10% 中性福尔马林溶液(见A.l)固定蒙古抱子虫包囊团或抱子，或用100% 乙醇保存,6. 4 样晶的标本制作,将蒙古抱子虫样品置于载玻片上，在标本中加一滴水，或者滴加少许吉姆萨溶液(见A. 2) ，盖上盖玻,片，用于显微镜观察,7 吉陶单极虫的鉴定,7. 1 吉陶单极虫形态学鉴定,根据显微镜内的测微标尺测量抱子和极囊的大小，吉陶单极虫抱子的形态特征见附录B 。成熟抱,子壳面观为长梨形，前端尖窄，近似圆锥体，后端钝圆，抱子外部具透明薄膜黯;抱子长23 . 0 μm~28. 0,μm ，宽7. 9μm~l 1. 0 μm ，厚8 . 3μm~10. 6μm; 极囊1 个，形状与抱子相似，长度约为抱子长的3 /5 ，极,囊长13 . 0 μm~18. 0 μm ，宽6.0 μm~8.5μm; 薄膜黯长30 . 0 μm~38. 0 μm ，宽12.0 μm~17. 0 μm; 极,丝盘成8 圈~10 圈,如果抱子的形态特征与上述描述相符，则可判定为疑似吉陶单极虫,7. 2 吉陶单极虫分子检测,7. 2. 1 虫体DNA 的提取,将用100 % 乙醇固定的抱子(有包囊的用清水冲洗，去除表面组织)充分干燥去除乙醇，置于1. 5 mL,的离心管中，加人0.5 mL 裂解缓冲液(见A. 6) , 55 oc 下过夜。冷却至室温后，加人500μLDNA 抽提,缓冲液(见A. 7) ，摇匀， 5 200 g 离心10 min ，收集上清液。然后加入O. 1 倍体积的乙酸铀缓冲液(见,A. 3) 和2 倍上清液体积的20 0C 预冷无水乙醇， 4 0C 下10000 g 离心10min 弃上清液，用70 % 乙醇洗涤,沉淀2 次，弃上清液，空气干燥后溶于40μLTE 缓冲液(见A.的中， 一20 0C 保存备用,7. 2. 2 18S rDNA 的PCR 扩增,在50μL 的PCR 反应体系中，包含模板基因组DNA 10 ng~50 ng 、1. 5 U Taq 酶、1. 5 mmo l/ L 的,MgClz 、0.2 mmol/ L 的dNTPs 、上游引物和下游引物各2μmo l/ L 、Taq 酶缓冲液5μL 。元加热盖的,PCR 仪应滴加少许矿物油,在PCR 扩增仪中， 95 0C 预变性5 min ，再95 0C 50 s?56 0C 50 s?720C 1 min ，共35 个循环;最后,72 0C延伸10 min ,PCR 扩增时，应设置阴性对照(无虫体DNA 模板〉和阳性对照(含吉陶单极虫DNA 模板),2,SC/T 7223. 4-2017,7. 2.3 PCR 产物电泳与测序,取5μL PCR 产物，加人1μL 澳酣蓝指示剂溶液(见A. 10) ，混……
……